【作者】王曉慧 應盛華 馮明光
【機構】浙江大學生命科學學院微生物研究所
摘要：首次從黑曲霉Aspergillus niger全基因組中克隆出黑曲霉硫氧還原蛋白基因AnTrx,并對其編碼蛋白的第33-37位保守區(qū)的活性位點實施定點突變C34S、C37S及C34S-C37S,獲得相應的3個定點突變基因。將野生型AnTrx及其突變子分別在大腸桿菌Escherichia coli中誘導表達,比濁法測定純化的各表達產(chǎn)物還原牛胰島素α與β鏈之間二硫鍵的活性。結(jié)果表明,AnTrx的3個突變體都不表現(xiàn)明顯催化活性。當突變型與野生型AnTrx等量混合后,發(fā)現(xiàn)突變型AnTrx-C34S可顯著提高野生型AnTrx的催化效率,而突變型AnTrx-C37S卻無此功能。由此證明,AnTrx活性結(jié)構域的第37位Cys殘基上的巰基能參與攻擊硫氧還蛋白和底物蛋白所形成的二硫鍵而釋放被還原的底物蛋白,而第34位Cys殘基同其他微生物的同一活性域一樣參與硫氧化還蛋白與底物的結(jié)合。這一結(jié)果有助于認識真菌硫氧還蛋白第37位活性位點的作用。
基金：國家自然科學基金重點項目(No.30930018)； 國家“973計劃”(No.2009CB118904)；
關鍵詞：定點突變; 催化活性; 比濁法;